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細(xì)胞分選是很多研究僧會(huì)遇到的實(shí)驗(yàn)，選對(duì)了方法，實(shí)驗(yàn)也就事半功倍，選擇哪種細(xì)胞分選方法是適合自己實(shí)驗(yàn)的方法呢，今天和大家具體聊聊……
細(xì)胞分選是根據(jù)細(xì)胞屬性，把一種細(xì)胞從多細(xì)胞樣品中分離出來(lái)的方法。細(xì)胞分選常見(jiàn)的方法有免疫磁珠分選、流式細(xì)胞分選、密度梯度離心、免疫密度離心，其中前兩種是最常用的細(xì)胞分選方法。那么小貍先簡(jiǎn)單叨叨這兩種方法原理與特點(diǎn)。

細(xì)胞分選原理
流式分選一般是電荷式分選，即對(duì)感興趣的目標(biāo)細(xì)胞（熒光染色或標(biāo)記）所在的液滴充上電荷，液滴經(jīng)過(guò)電極板，通過(guò)電場(chǎng)作用發(fā)生偏轉(zhuǎn)，從而實(shí)現(xiàn)分選。
磁珠分選使用磁珠偶聯(lián)的抗體去標(biāo)記細(xì)胞，然后把標(biāo)記好的細(xì)胞懸液置于磁場(chǎng)中，帶磁珠的細(xì)胞就留在試管里，不帶磁珠的細(xì)胞在上清中，從而實(shí)現(xiàn)分選。

流式分選與磁珠分選的比較

綜上，對(duì)于分選細(xì)胞數(shù)量多，或者沒(méi)有流式儀器，再或者需要保持細(xì)胞高活力的小伙伴們，磁珠分選是大家首選的方法。

無(wú)需流式儀，保持細(xì)胞高活力細(xì)胞分選方法——首選海貍磁珠法細(xì)胞分選

做磁珠分選，大家首先要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c指標(biāo)來(lái)選擇是用陽(yáng)選、陰選還是復(fù)合分選。

陽(yáng)選、陰選、復(fù)合分選
陽(yáng)性分選：運(yùn)用特異性抗體偶聯(lián)磁珠直接從細(xì)胞混合物中分離目的細(xì)胞的分選方法稱(chēng)為positive?selection。陽(yáng)性分選中磁珠標(biāo)記的細(xì)胞即為目的細(xì)胞。該法簡(jiǎn)單、快速、細(xì)胞得率和純度較高。如采用anti-CD14磁珠分選CD14+巨噬細(xì)胞。

陰性分選（也叫去除分選）：用抗體偶聯(lián)磁珠去除無(wú)關(guān)細(xì)胞，使目的細(xì)胞得以純化和分離的分選方法稱(chēng)為negative?selection。陰性分選中磁珠標(biāo)記的細(xì)胞為非目的細(xì)胞。陰性分選法適用于：
①?gòu)募?xì)胞混合物中去除某種類(lèi)型細(xì)胞。如腫瘤細(xì)胞；
②缺乏針對(duì)目的細(xì)胞篩選的特異性抗體，如腫瘤細(xì)胞 ；
③抗體和目的細(xì)胞結(jié)合可能誘導(dǎo)細(xì)胞活化，影響后續(xù)細(xì)胞功能分析。

復(fù)合分選：將陰性分選和陽(yáng)性分選相結(jié)合的分選方法。適用于：
①分選非常稀有細(xì)胞，可采用陰性分選發(fā)先去除其他雜細(xì)胞，再采用陽(yáng)性分選篩選目的細(xì)胞；
②非目的細(xì)胞也表達(dá)用來(lái)陽(yáng)性選擇的抗原。
③降低細(xì)胞分選的成本，與流失分選聯(lián)合使用。（很多專(zhuān)家正在使用的方法）

對(duì)于磁珠分選方法，小伙伴們普遍用的應(yīng)該是美天旎或Thermo的磁珠分選產(chǎn)品。今天小貍給大家?guī)?lái)大福利，一款性?xún)r(jià)比更高的細(xì)胞分選磁珠——BeaverBeads? Streptavidin，只用普通的磁性分離架，即可進(jìn)行細(xì)胞分選，細(xì)胞去除率可到80%-90%。

大粒徑磁珠分選的實(shí)驗(yàn)流程圖

利用SA磁珠固定生物素標(biāo)記的抗體（可根據(jù)需要去除細(xì)胞種類(lèi)，選擇固定1種或多種抗體），室溫孵育15 min，洗滌、重懸后，即可進(jìn)行后續(xù)的細(xì)胞分選。
磁珠和細(xì)胞投入比例推薦：
50 μL磁珠（10 mg/mL）——2 μg生物素化抗體——捕獲10^6-10^7個(gè)細(xì)胞
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使用海貍SA磁珠已發(fā)表文章：
1、NATURE IMMUNOLOGY  卷: 16   期: 9   頁(yè): 991-999   出版年: SEP 2015
The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of TFH cells during acute viral infection
2、Immunity  47, 538–551  2017.08
The Kinase mTORC1 Promotes the Generation and Suppressive Function of Follicular Regulatory T Cells
3、Frontiers in Immunology   Volume 9 ， Article 1127 ，May 2018
The Kinase complex mTOR complex2 Promotes the Follicular Migration and Functional Maturation of Differentiated Follicular Helper CD4+ T cells During Viral infection